淀粉含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。货号:DM-SP10018规格:50T/48Syy易游体育 内容:试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;试剂二:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;标准品:粉剂×10mg支,4℃保存;临用前加入 1mL 蒸馏水溶解,制备 10mg/mL 葡萄糖标准液。yy易游体育 说明:淀粉是植物中糖的主要储存形式,其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都 有重要意义。利用80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开,进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖,采 用蒽酮比色法测定葡萄糖含量,即可计算淀粉含量。需自备的仪器和用品:可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵、冰、浓硫酸(不允许快递)、 蒸馏水。操作步骤:一、淀粉提取:1 、称取约 0. 1g 样品于研钵中研碎,加入 1mL 试剂一,充分匀浆后转移到 EP 管中,80℃水浴提取 30min ,3000g ,常温离心 5min ,弃上清,留沉淀。2 、沉淀中加入0.5mL 双蒸水,放入沸水浴中糊化 15min(盖紧,以防止水分散失)。3 、冷却后,加入 0.35mL 试剂二,常温提取 15min ,振荡 3-5 次。4 、加入 0.85mL 双蒸水,混匀,3000g ,常温离心 10min ,取上清液。5 、取上清液 100μL 加入 700μL 蒸馏水后即进行了八倍稀释测定。注:若稀释八倍后样品吸光度大 于 1.5 或小于 0.1 ,建议将样品再进行适当稀释或浓缩后测量。标准溶液准备:将10mg/mL 葡萄糖标准液进行二倍稀释得到 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、 0.00156mg/mL 标准溶液备用。二、测定操作表:1 、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 620nm ,蒸馏水调零。2 、调节水浴锅至 95℃。3 、工作液的配制:临用前在试剂三中加入 13.5mL 蒸馏水后,缓慢加入 76.5mL 浓硫酸,不断搅拌, 充分溶解,待用。4 、标准品测定:取 0.2mL 标准溶液(蒸馏水做空白)和 1mL 工作液至 EP 管中,95℃水浴 10 min (盖紧,防止水分散失),自然冷却至室温,在 620 nm波长下测定吸光度值 A 标准及A 空白。计算 ΔA=A 标准-A 空白。5 、样本测定:取0.2mL样本和1mL工作液至EP管中,95℃水浴10 min(盖紧,防止水分散失), 自 然冷却至室温,在620 nm 波长下测定吸光度值A测定。ΔA´=A测定- A空白。三、淀粉含量计算:1 、标准曲线绘制:以 0.2 、0.1 、0.05 、0.025 、0.0125 、0.00625 、0.003125 、0.00156mg/mL 葡萄糖标准溶液为横坐 标,ΔA 为纵坐标绘制标准曲线,得到线性回归方程 y=kx+b ,将ΔA´代入方程得到 x(mg/mL); 2、 淀粉含量计算:(1)、按照蛋白浓度计算淀粉含量(mg/mg prot)=x×稀释倍数×V 提取÷(Cpr×V 提取)=8x÷Cpr2 、按样本鲜重计算淀粉含量(mg/g 鲜重)=x×稀释倍数×V 提取÷W= 13.6x÷WV 提取:提取后体积,1.7 mL;Cpr:样本提取后蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;稀释倍数:8。注意事项:由于工作液具有强腐蚀性,请谨慎操作。本yy易游体育 仅供科学研究使用!请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途!
植物蔗糖含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。货号:DM-SP10019规格:50T/48Syy易游体育 内容:提取液:液体 100ml×1 瓶,4℃保存;试剂一:粉剂10mg×1支 ,4℃保存,临用前加1mL蒸馏水溶解,用水稀释10倍,备用,即1mg/mL。试剂二:液体2.5ml×1 瓶,4℃保存;试剂三:液体 40ml×1 瓶,4℃保存; 试剂四:液体 10ml×1 瓶,4℃保存; 试剂五:粉剂0.5g×1 瓶,常温保存。yy易游体育 说明:蔗糖是植物光合作用的主要产物,也是糖分运输和储藏的主要形式。因此,测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外,蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等yy易游体育 质量控制的重要指标之一。先用碱与样品共热,破坏其中的还原糖。然后在酸性条件下将蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,果糖进一步与间苯二酚反应,生成有色物质,在480nm 下有特征吸收峰。自备实验用品:可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。操作步骤:一、 蔗糖的提取称取0.1~0.2g 样本,常温研碎,加入1mL 提取液,适当研磨后快速转移到离心管中,置于80℃ 水浴锅中10min,振荡3~5 次,冷却后,4000g,25℃离心10min,取上清,加入2mg试剂五,80℃脱色30min,再加入1mL 提取液,4000g,25℃离心10min,取上清液测定。二、 测定操作混匀,沸水浴 30min,冷却后 480nm 处蒸馏水调零,空白管、标准管和测定管分别记为 A1、A2 和 A3。三、 蔗糖含量计算:1、 按照蛋白质含量计算蔗糖含量(mg/mg prot)=(C 标准管)×V1×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr此法需要自行测定蛋白浓度。2、按照样品质量计算蔗糖含量(mg/g 鲜重)=(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=2×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。C 标准管:标准管浓度,1mg/mL;V1:加入样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,2mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。注意:当测定 OD480 超过 1.6 时,建议稀释后测定。
可溶性酸性转化酶(Soluble acid invertase, S-AI)试剂盒说明书可见分光光度法 货号:DM-SP10021 规格:50 管/24 样正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:蔗糖转化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖 代谢关键酶之一。根据*适 pH,Ivr 分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。AI 的*适 pH 为 3~5。AI 分为可溶性 AI(S-AI)和细胞壁不溶性 AI(B-AI)两种类型。 S-AI 主要存在于细胞液泡或自由空间中,*适 pH 为 4.5~5.0(酸性),通过降解液泡中蔗 糖,调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。测定原理:S-AI 催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 510nm有特征光吸收,在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与 S-AI 活性成正比。 自备用品:可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 试剂组成和配制:提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入25mL试剂一充分溶解备用;用不完的试剂 4℃ 保存;试剂三:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;粗酶液提取:按照组织质量( g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。测定步骤和加样表:试剂名称 (μL)测定管对照管样本200200试剂一800试剂二800混匀, 37℃准确水浴 30min 后,95℃水浴 10min(盖紧,以防水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)试剂三500500混匀,95℃水浴 10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀,510nm 处,蒸 馏水调零,记录各管吸光值 A,如果吸光值大于 2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘 以相应稀释倍数),ΔA=A 测定-A 对照。S-AI 活性计算:标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.001;x 为标准品浓度 (μg/mL),y 为吸 光值。(1)按蛋白浓度计算:单位的定义:37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。S-AI 活性 (μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T =20.8×(ΔA +0.001)÷Cpr(2)按鲜重计算:单位的定义:37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。S-AI 活性 (μg/min/g 鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001)÷WV1:加入反应体系中样本体积,0.2mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
葡萄糖含量检测试剂盒说明书 注意:正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定货号:DM-SP10020规格:50T/48S yy易游体育 简介:可见分光光度法葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物,而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言,葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源,而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。试验中所需的仪器和试剂:可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。yy易游体育 内容:试剂一:葡萄糖 9mg×1支,4℃保存;临用前加入1ml蒸馏水充分溶解为50μmol/mL 葡萄糖溶液,用蒸馏水稀释为 0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 -20℃ 保存;试剂二:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;试剂三:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;混合试剂的配制:使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合,用多少配多少。操作步骤:一、葡萄糖提取:1、组织的处理:称取约 0.1g 样本,加入 1mL 蒸馏水研磨成匀浆,置沸水浴中煮沸 10 分钟(盖紧,防止水分散失),冷却后,8000g,常温离心 10min,取上清液备用。2、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水), 超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复 30 次),置沸水浴中煮沸 10 分钟(盖紧,防止水分散失),冷却后,8000g,25℃离心 10min,取上清液备用。二、测定操作表:1、分光光度计预热 30min。波长调至 505nm,蒸馏水调零。2、在 1.5mL 离心管中依次加入下列试剂:试剂(μL)空白管标准管测定管样本100试剂一100蒸馏水100混合试剂900900900混匀,置 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴中,保温 15min,于 505nm 波长处读取吸光度。 葡萄糖含量计算:1、按蛋白浓度计算葡萄糖含量(µmol/mg prot)=C ×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样÷(Cpr×V样)=0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr2、按样本鲜重计算葡萄糖含量(µmol/g 鲜重)=C ×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ×V 样÷(W÷V样总×V 样)=0.5 ×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W3、按细菌或细胞数量计算葡萄糖含量(µmol/104 cell)=C ×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) ×V 样÷(500÷V样总×V 样)=0.001 ×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)C:葡萄糖溶液浓度,0.5µmol/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;V 样:加入的样本体积,100µL=0.1mL;V 样总:样本总体积,1mL;W:样本鲜重,g;500:细菌或细胞数量,500 万。4、若 A 测定管大于 1.5,稀释后进行实验。
丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量试剂盒说明书微量法 货号:DM-W-A401 规格:100管/96样正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸,生成过氧化脂质;后者逐渐分解为一系列复杂的化合物,其中包括MDA。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。测定原理:MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)缩合,生成红色产物,在532nm有*大吸收峰,进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量;同时测定600nm下的吸光度,利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算 MDA 的含量。需自备的仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配置:提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;注意事项:临用前注意试剂一是否完全溶解,如未溶解,可以70℃加热,并振荡以促进溶解。MDA 提取:1、细菌、细胞或组织样品的制备:细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。2、血清(浆)样品:直接检测。测定步骤:1、吸取0.3mL试剂一于1.5mL离心管中,再加入0.1mL样本, 混匀。2、95℃水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),置于冰浴中冷却,10000g,25℃,离心10min。3、吸取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中,测定532nm和600nm处的吸光度,记为A532 和A600,ΔA= A532-A600。MDA 含量计算:a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下1、血清(浆)中 MDA 含量的计算:MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样=25.8×ΔA2、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算(1)按照蛋白浓度计算MDA含量(nmol/mg prot)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样)=25.8×ΔA ÷Cpr需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。(2)按照样品质量计算MDA含量(nmol/g 鲜重)=[ ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)=25.8×ΔA ÷W(3 ) 按照细菌或细胞密度计算:MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)=0.0516×ΔAV 反总:反应体系总体积, 4×10-4L;ε:丙二醛摩尔消光系数,155×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。b.用96 孔板测定的计算公式如下1、血清(浆)中 MDA 含量的计算:MDA含量(nmol/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样=51.6×ΔA2、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算(1)按照蛋白浓度计算MDA含量(nmol/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样)=51.6×ΔA÷Cpr需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。(2)按照样品质量计算MDA含量(nmol/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)=51.6×ΔA÷W(3 ) 按照细菌或细胞密度计算:MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)=0.1032×ΔAV 反总:反应体系总体积,4×10-4L;ε:丙二醛摩尔消光系数,155×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。 技术支持电话:400-9681786电子邮件:dm_support@sina.com网址:aiwancq.com生产厂家:上海yy易游体育生物科技有限公司
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