鼠抗猪蓝耳(猪繁殖与呼吸综合征PRRSV)单克隆抗体 Product Name：Monoclonal mouse anti- Pig blue ear（PRRSV） 【规格】：1mg/支 【Specification】: 1mg / branch 【浓度】：4.8mg/ml 【Concentration】: 4.8mg / ml 【亚型】: IgG 【MabIsotypes】: IgG【特异性】：与其他物种没有交叉反应 【Specificity】: No cross reaction with other species 【株号及应用】：9B2,4H1，10A3 可于免疫层析、ELISA、WB、IHC 【纯化方式】：亲和层析纯化，纯度>99% 【Purification】: Chromatography on protein G sepharose 【Buffer】： PBS,pH7.4,0.09 % sodium azide (NaN3)【储存】：-20℃, 避免反复冻融 【Storage】:-20 ℃ 【免疫抗原】猪蓝耳病毒，纯度>99.5%， 1mg/支 【Antigen】：PRRSV,Purity > 99.5%, 1mg / branch
【规格】：1mg/支 【Specification】: 1mg / branch 【浓度】：2-10mg/ml 【Concentration】: 2-10mg / ml 【亚型】: IgG 【MabIsotypes】: IgG 【特异性】：与其他物种没有交叉反应 【Specificity】: No cross reaction with other species 【应用】：可于免疫层析、ELISA、WB、IHC，17A8/1C3 【Application】: It can be used in immunochromatography, ELISA, WB, IHC, Paired 17A8/1C3 【纯化方式】：亲和层析纯化，纯度>99% 【Purification】: Chromatography on protein G sepharose 【Buffer】： PBS,pH7.4,0.09 % sodium azide (NaN3) 【储存】：-20℃, 避免反复冻融 【Storage】:-20 ℃ 【抗原】牛结核融合抗原，纯度>99.5%, 1mg/支 【Antigen】：Mycobacterium tuberculosis, Purity > 99.5%, 1mg / branch
英 文：RecombinantBovinetuberculosisMPB70-MPB83fusion Antigen-2 货 号：DM-549 来 源：真核表达，杆状病毒载体 ，重组表达 蛋白浓度：2mg/ml 蛋白纯度： 大于95%（SDS-PAGE 电泳） 缓 冲 液： 0.01MPBS,PH7.4 效价：推荐ELISA包被浓度 1:2000，不同体系下效价不同 包装规格： 1mg 保存条件： 密封避光保存-30±10℃, 避免反复冻融 稳 定性： 冻融一次复检合格，有效期3年 相关yy易游体育 ：布氏杆菌LPS抗原；布氏杆菌BP26抗原；布氏杆菌VirB12抗原; 包虫病/细粒棘球绦虫抗原；纯化结核LPS抗原;牛结核融合蛋白抗原；口蹄疫非 结构蛋白3ABC抗原;O 型口蹄疫VP1抗原；A型口蹄疫抗原；亚洲I型口蹄疫 抗原；牛病毒性腹泻E2抗原;猪瘟E2/E0抗原；猪蓝耳N抗原 ；猪蓝耳N-NSP7 融合抗原 ；猪圆环2型3型CAP抗原;猪伪狂犬gB抗原；猪伪狂犬gE抗原； 猪伪狂犬gE抗原；猪旋毛虫抗原；小反刍兽疫N抗原;非洲猪瘟抗原P30；非洲 猪瘟抗原P54；非洲猪瘟抗原；非洲猪瘟抗原P72；马传染性贫血p26抗原；牛 传染性胸膜肺疫抗原;牛副结核抗原；禽白血病P27抗原；非洲猪瘟CD2V蛋白; 禽流感H5抗原;禽流感H9抗原;猪流行性腹泻病毒S.N抗原；牛传染性鼻气管炎 IBR；猪传染性胃肠炎病毒TGEV 上海yy易游体育生物科技有限公司
Catalogue：DM064 抗猪伪狂犬病毒(PRV)配对单克隆抗体 Product Name：Monoclonal mouse anti- Swine pseudorabies virus(PRV) 【规格】：1mg/支 【Specification】: 1mg / branch 【浓度】：2-10mg/ml 【Concentration】: 2-10mg / ml 【亚型】: IgG 【Mab Isotypes】: IgG【特异性】：与其他物种没有交叉反应 【Specificity】: No cross reaction with other species 【应用】：可于免疫层析、ELISA、WB、IHC ，配对 12D6 / 11D9 【Application】: It can be used in immunochromatography, ELISA, WB, IHC, Pairing 12D6 / 11D9【纯化方式】：亲和层析纯化，纯度>99% 【Purification】: Chromatography on protein G sepharose 【Buffer】： PBS, pH 7.4, 0.09 % sodium azide (NaN3) 【储存】：-20℃, 避免反复冻融 【Storage】: -20 ℃ 【抗原】猪伪狂犬 BZ 株，重组 gD/gE/gB 蛋白，纯度>99.5%， 1mg/支 【Antigen】：Swine pseu，orabies virus gD/gb/gE, Purity > 99.5%, 1mg / branch
蛋白浓度：2mg/ml 蛋白纯度： 大于80%（SDS-PAGE 电泳）缓 冲 液：0.01MPBS,PH7.4 效价：西门子试剂检测浓度效价再50万左右包装规格： 1mg 保存条件： 密封避光保存-30±10℃, 避免反复冻融 用途：校准，质控 稳 定性：冻融，37度破坏性实验发现抗原具有良好的稳定性检测原理：ELISA试剂盒采用抗体夹心法:将抗某蛋白抗体包被于酶标板上，标本和标准品中的某蛋白与抗体结合，加入生物素化的抗某蛋白抗体，再加入SABC复合物与生物素抗体结合，形成免疫复合物，然后加入TMB显色底物，显色剂显蓝色，＊后加终止液变黄色，游离的成分被洗去。在450 nm处测OD值，某蛋白浓度与OD值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出标本中某蛋白的浓度。试剂盒组分: （保存温度4℃）名 称规格（48 T）规格（96 T）预包被酶标板8×6条8×12条标准品1支1支标准品/样品稀释液10ml15ml生物素化检测抗体（100×）60ul120ul生物素化检测抗体稀释液6ml12mlSABC复合物6ml12mlTMB显色液（A/B）各3ml各6ml终止液6ml12ml20×浓缩洗涤液 30ml60ml封板胶纸2张4张yy易游体育 说明书1份1份本试剂盒用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液及其它生物体液。 标本收集与试剂准备: 1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。待测样本应尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。2. 洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水）3. 标准品配制：取7个1.5ml离心管，分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。从第一至七管中分别加入标准品/样品稀释液200ul。在管中加入标准品溶液200ul，置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第六管中吸出200ul弃去，第七管为空白对照。4.5. 生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟，用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。6. TMB显色液的配置：使用前10分钟，将TMB显色液A液和B液1：1混合，避光放置备用。7. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品＊高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。检测程序:1. 加样：空白孔加入50μl标准品/样品稀释液，其余孔各加入标准品或待测样品50ul，将反应板混匀后置37℃，40分钟。2. 洗板：用1×洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震荡/浸泡1-2分钟，向滤纸上印干。3. 空白孔加入100ul生物素化抗体稀释液，其余孔各加入1×的生物素化抗体工作液100ul，混匀后置37℃，30分钟。4. 洗板：同上。5. 每孔加入SABC复合物工作液100ul，混匀后置37℃，20分钟。6. 洗板：同上。7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混匀后置37 ℃暗处反应10-20分钟（具体显色时间根据显色结果而定）。8. 每孔加入100ul终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果判断与计算：1. 所有OD值建议减除空白值后再行计算，如空白OD低于0.1，也可以直接计算。2. 以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能:1、 检测范围:0.156-10ng/mL2、 特异性:同时可检测重组或天然的某种蛋白或抗体，不与其它细胞因子有交叉反应。3、 重复性:板内，板间变异系数均小于10%。注意事项1. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测，每次检测都应做标准曲线。2. 洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象，37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。3. 检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩余板条需封好，放回袋中2 个月内用完。4. 试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。5. 仅用于科研，不能用于临床诊断！
猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（蓝耳）抗原 蛋白浓度：2mg/ml 蛋白纯度： 大于 95%（SDS-PAGE 电泳） 缓 冲 液： 0.01M PBS, PH 7.4 效价：推荐 ELISA 包被浓度 1:2000，不同体系下效价不同 包装规格： 1 mg 保存条件： 密封避光保存-30±10℃, 避免反复冻融 稳 定 性： 冻融一次复检合格，有效期两年
3-磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒本品用于科研实验,不用于临床。生化试剂盒可以检测的样本类型有哪些? 生化试剂盒的实验原理是基于化学反应,理论上是不受生物种属及样本类型的限制。生化试剂盒样本检测通常只分样本类型,不分种属。但是某些指标在不同种属或类型样本中的提取方式不同。因此,具体情况请参见说明书或与技术支持联系确认。生化试剂盒样本检测的一般要求:1)于生化检测而言,样本无溶血、脂血、的现象。组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。2)样本处理后尽快进行检测,且保存于冰盒之上,待测。求3)样本需澄清,若不澄清,需离心后取上清进行检测(特殊指标除外)。4)样本值应在试剂盒线性范围内,若超过线性范围,需稀释后再进行检测,若低于检测范围,需增加样本浓度后进行检测。微量法和分光光度法的区别?分光光度法:主流测定体系为1mL,测试仪器分光光度计,能够大限度地满足绝大多数用户的需要。微量法:主流测定体系为0.2mL,测试仪器或分光光度计,测定更加简便快捷。试剂盒规格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48样:50管指能够做50次测定,48样指可以测试48个样品。如果每个样品重复测定3次,那么只能测定16个样品。其中有2次测定用于空白管或者对照管。值得特别注意的是,50管/24样中由于每个样品测定都需要做对照,因此能够测定样品的数量仅为8个(假设做3次重复)(2)100管/96样:100管指能够做100次测定,96样指可以测定96个样品,如果每个样品重复测定3次,那么只能测定32个样品。其中有4次测定用于空白管或者对照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理论测定次数少1~3次。其它规格的含义依次类推。值得特别注意的是,100管/48样中由于每个样品测定都需要做对照,因此能够测定样品的数量仅为16个(假设做3次重复)。如何防止试剂盒失效? 不要过早订购,以免试剂盒失效.收到试剂盒后,检查外包装是否正常。马上打开,按照试剂盒说明书核对试剂数量是否正确,注意瓶中试剂状态是否与说明书一致。如果有问题,或者怀疑,马上联系公司销售,进行确认。如果没有问题,请务必按照说明书进行试剂的保存。注意,不同试剂,可能需要分别保存在常温(25°℃)、4℃和-20℃,务必分别按照要求保存,不要整个试剂盒放置于冰箱。如何进行预测定?(1)务必在7个工作日内进行预测定,以确定该试剂盒是否适合您的样品,以免造成试剂盒和样品的浪费。(2)选择2~3个预期差异比较大的样品,严格按照说明书进行操作,注意仪器工作状态,操作规范,控制好测定条件,尤其是温度。(3)如实与公司销售沟通预测定结果,公司技术人员会确认测定结果是否正常,是否需要调整,如何进行调整,从而确保您的测定结果可靠。荧 光 分 析 法 荧光分析法是指利用某些物质被紫外光照射后处于激发态，激发态分子经历一个碰撞及发射的去激发过程所发生的能反映出该物质特性的荧光，可以进行定性或定量分析的方法。由于有些物质本身不发射荧光（或荧光很弱），这就需要把不发射荧光的物质转化成能发射荧光的物质。例如用某些试剂（如荧光染料），使其与不发射荧光的物质生成络合物，各种络合物能发射荧光，再进行测定。因此荧光试剂的使用，对一些原来不发荧光的无机物质和有机物质进行荧光分析打开了大门，扩展了分析的范围。比色皿有哪些规格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法试剂盒都是选用1mL体系,只能用1mL比色皿,不可以用更大体积的比色皿,否则试剂量不够,无法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法试剂盒都是选用0.25mL比色皿。一般客户都选择使用标仪(需要自备酶标板)(3)紫外波长检测需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同规格的比色皿,其外观大小是一致的,都是1cm光径(也有0.5cm光径的比色皿,不常见,也可以用,但是计算时要注意修改计算公式),其内容积差异在于壁的厚度。代测的优点(1)更加省事儿,完全不必为测定犯难。用户只要提供样品和想测定的指标,就不再需要为测定操心了,不再受到操作技能、仪器设备和时间的限制,就等着拿到数据写论文。(2)测定数据更有保障。严格的测定质量管理体系,从而保证了测定结果的真实可靠。yy易游体育 还建立了免费预测定制度。(3)防止样品损失无论是用户自己完成测定全过程,还是购买试剂盒完成测定,都可能因为缺乏测定经验,导致测定失败,从而损失样品的情况。对于生命科学研究而言,样品是＊珍贵的。样品一旦损失,轻则造成研究进度被耽搁,重则造成研究完全失败!代测能够充分保证测定成功,从而防止了样品损失。当然,样品质量是测定成功的前提,而且样品质量只有用户自己才能控制和保证。生化检测试剂盒的基本原理 生化检测试剂盒,又称生化试剂盒,是利用特定的生物成分、动力学及化学反应等技术制备的试剂盒,用于检测生理学、病理学、药理学等领域中特定的生物分子或化学物质。生化检测试剂盒包括底物、酶试剂盒、探针等多个组成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化检测试剂盒检测的基本原理。在该过程中,底物与酶在细胞膜上结合形成基质酶,进而形成底物-酶复合物。随着时间的推移,底物-酶复合物逐渐分解,释放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代谢,同时底物、酶和代谢产物都会对复合物的稳定性产生影响,从而影响检测试剂盒的检测结果。生化试剂盒可以检测的样本类型有哪些? 生化试剂盒的实验原理是基于化学反应,理论上是不受生物种属及样本类型的限制。生化试剂盒样本检测通常只分样本类型,不分种属。但是某些指标在不同种属或类型样本中的提取方式不同。因此,具体情况请参见说明书或与技术支持联系确认。生化试剂盒样本检测的一般要求:1)于生化检测而言,样本＊-好无溶血、脂血、黄-疸的现象。组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。2)样本处理后＊-好尽快进行检测,且保存于冰盒之上,待测。3)样本需澄清,若不澄清,需离心后取上清进行检测(特殊指标除外)。4)样本值应在试剂盒线性范围内,若超过线性范围,需稀释后再进行检测,若低于检测范围,需增加样本浓度后进行检测。微 量 分 析 法 微量分析(Microanalysis)在化学分析中，其试样重量为1-10mg的化学分析方法称为微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用点滴反应和显微结晶反应等灵敏度较高的分析方法，定量分析常用重量、容量及仪器等分析方法。在以试样重量不同的分析分类中还有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析 微量、超微量分析和常量分析主要的差别是取样的不同。一般称样在0.01克~0.001克者为微量分析，小于0.001克者为超微量分析。正因为样品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示剂的误差等对常量分析的影响可以忽略，而在微量和超微量分析时就会引起很大的误差。尤其是超微量分析要求更严格，须考虑到溶液本身在空气中的蒸发，因此在进行滴定时必缓在潮湿的空气中进行。 一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各种不同的形状。各种仪器分析法经过适当的改进后，可以直接应用在微量分析上。超微量分析由于样品太少，因此必须在显微镜下进行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些仪器分析(如电位滴定，电解和电导等)，也可用来作为超微量分析之用。 微量分析在研究工作中用得极广。尤其是在进行稀有元素化学研究时，在解决地球化学同题，研究某些稀有元素矿物粗成及其分配规律时，往往只能得到极少的样品，在这选种情况下一般的常量分析法是无法进行分析的，只有靠微量分析法来解决。另外，在生物化学中微量分析的应用更是普遍3-磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒本品用于科研实验,不用于临床。测定意义:辅酶NAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的 NADH 经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成 ATP 的同时,形成大量的 ROS,同时 NADH 再生为 NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和 TCA 循环的强弱。较高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。测定原理:分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD+和 NADH,NADH 通过 PMS 的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在 570nm 下检测吸光值;而 NAD+可被乙醇脱氢酶还原为 NADH,进一步采用 MTT 还原法检测。需自备的仪器和用品:酶标仪、台式离心机、移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制:酸性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;碱性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:液体 10 mL×1 瓶,4℃保存;试剂二:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存;试剂三:粉剂×1 瓶,-20 ℃保存,用时加入 3mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;试剂四:粉剂×1 瓶,4 ℃保存,用时加入 3mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;试剂五:液体 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;试剂六:液体 30mL×1 瓶,4 ℃保存;试剂七:液体 50mL×1 瓶,4 ℃保存。NAD+和 NADH 的提取:1 血清(浆)中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照血清(浆)体积(mL):酸性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1mL 血清(浆),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。NADH 的提取:按照血清(浆)体积(mL):碱性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1mL血清(浆),加入 1mL 碱性提取液),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。2 组织中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照组织质量(g):酸性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1g 组织,加入 1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。NADH 的提取:按照组织质量(g):碱性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1g 组织,加入 1mL碱性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。3 细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104 个):酸性提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 酸性提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。NADH 的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104 个):碱性提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 碱性提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。充分混匀,静置 5min 后,20000g,25℃离心 5min,弃上清,沉淀中加入:混匀,取 200μL 转移至微量石英比色皿或 96 孔板中,570nm 下读取对照吸光值 A1 和测定管吸光值 A2,计算△A=A2-A1。注意事项:1、如果一次性测定样本数较多,可将试剂一、二、三和四按比例配成混合液。2、对照管和测定管的测定步骤的区别:对照管加完试剂一、二、三、四和五后必须马上加试剂六;测定管加完试剂一、二、三、四和五后必须反应 20min 后再加试剂六。3、反应过程中注意避光。4、若 NAD+测定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 测定中△A(A2-A1)≤0.0222,说明样本中辅酶含量较低,已低于检测限,可做如下调整:(1)将测定管避光静置时间 20min 延长到 60min;(2)在提取阶段增加取样量,即取 0.2g 样本或 0.2mL 样本加入 1mL 提取液。5、由于每一个测定管需要设一个对照管,本试剂盒 100 管保证测 48 个 NAD+或 NADH.NAD+和 NADH 含量的计算:(一) NAD+含量的计算标准条件下的回归曲线为 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 为△A,x 为 NAD+浓度 nmol/mL1、血清(浆)中 NAD+含量计算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、组织、细菌或细胞中 NAD+含量计算(1)按样本蛋白浓度计算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按样本鲜重计算NAD+(nmol/g 鲜重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按细菌或细胞密度计算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH 含量的计算标准条件下的回归曲线为 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 为△A,x 为 NADH 浓度 nmol/mL1、血清(浆)中 NADH 含量计算NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、组织、细菌或细胞中 NADH 含量计算(1)按样本蛋白浓度计算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按样本鲜重计算NADH (nmol/g 鲜重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按细菌或细胞密度计算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,2mL;V3:加入血清(浆)体积:0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。注 意: 检测限为 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鲜重 或 0.001nmol/mg prot
果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FBA)测试盒本品用于科研实验,不用于临床。生化试剂盒可以检测的样本类型有哪些? 生化试剂盒的实验原理是基于化学反应,理论上是不受生物种属及样本类型的限制。生化试剂盒样本检测通常只分样本类型,不分种属。但是某些指标在不同种属或类型样本中的提取方式不同。因此,具体情况请参见说明书或与技术支持联系确认。生化试剂盒样本检测的一般要求:1)于生化检测而言,样本无溶血、脂血、的现象。组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。2)样本处理后尽快进行检测,且保存于冰盒之上,待测。求3)样本需澄清,若不澄清,需离心后取上清进行检测(特殊指标除外)。4)样本值应在试剂盒线性范围内,若超过线性范围,需稀释后再进行检测,若低于检测范围,需增加样本浓度后进行检测。微量法和分光光度法的区别?分光光度法:主流测定体系为1mL,测试仪器分光光度计,能够大限度地满足绝大多数用户的需要。微量法:主流测定体系为0.2mL,测试仪器或分光光度计,测定更加简便快捷。试剂盒规格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48样:50管指能够做50次测定,48样指可以测试48个样品。如果每个样品重复测定3次,那么只能测定16个样品。其中有2次测定用于空白管或者对照管。值得特别注意的是,50管/24样中由于每个样品测定都需要做对照,因此能够测定样品的数量仅为8个(假设做3次重复)(2)100管/96样:100管指能够做100次测定,96样指可以测定96个样品,如果每个样品重复测定3次,那么只能测定32个样品。其中有4次测定用于空白管或者对照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理论测定次数少1~3次。其它规格的含义依次类推。值得特别注意的是,100管/48样中由于每个样品测定都需要做对照,因此能够测定样品的数量仅为16个(假设做3次重复)。如何防止试剂盒失效? 不要过早订购,以免试剂盒失效.收到试剂盒后,检查外包装是否正常。马上打开,按照试剂盒说明书核对试剂数量是否正确,注意瓶中试剂状态是否与说明书一致。如果有问题,或者怀疑,马上联系公司销售,进行确认。如果没有问题,请务必按照说明书进行试剂的保存。注意,不同试剂,可能需要分别保存在常温(25°℃)、4℃和-20℃,务必分别按照要求保存,不要整个试剂盒放置于冰箱。如何进行预测定?(1)务必在7个工作日内进行预测定,以确定该试剂盒是否适合您的样品,以免造成试剂盒和样品的浪费。(2)选择2~3个预期差异比较大的样品,严格按照说明书进行操作,注意仪器工作状态,操作规范,控制好测定条件,尤其是温度。(3)如实与公司销售沟通预测定结果,公司技术人员会确认测定结果是否正常,是否需要调整,如何进行调整,从而确保您的测定结果可靠。荧 光 分 析 法 荧光分析法是指利用某些物质被紫外光照射后处于激发态，激发态分子经历一个碰撞及发射的去激发过程所发生的能反映出该物质特性的荧光，可以进行定性或定量分析的方法。由于有些物质本身不发射荧光（或荧光很弱），这就需要把不发射荧光的物质转化成能发射荧光的物质。例如用某些试剂（如荧光染料），使其与不发射荧光的物质生成络合物，各种络合物能发射荧光，再进行测定。因此荧光试剂的使用，对一些原来不发荧光的无机物质和有机物质进行荧光分析打开了大门，扩展了分析的范围。比色皿有哪些规格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法试剂盒都是选用1mL体系,只能用1mL比色皿,不可以用更大体积的比色皿,否则试剂量不够,无法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法试剂盒都是选用0.25mL比色皿。一般客户都选择使用标仪(需要自备酶标板)(3)紫外波长检测需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同规格的比色皿,其外观大小是一致的,都是1cm光径(也有0.5cm光径的比色皿,不常见,也可以用,但是计算时要注意修改计算公式),其内容积差异在于壁的厚度。代测的优点(1)更加省事儿,完全不必为测定犯难。用户只要提供样品和想测定的指标,就不再需要为测定操心了,不再受到操作技能、仪器设备和时间的限制,就等着拿到数据写论文。(2)测定数据更有保障。严格的测定质量管理体系,从而保证了测定结果的真实可靠。yy易游体育 还建立了免费预测定制度。(3)防止样品损失无论是用户自己完成测定全过程,还是购买试剂盒完成测定,都可能因为缺乏测定经验,导致测定失败,从而损失样品的情况。对于生命科学研究而言,样品是＊珍贵的。样品一旦损失,轻则造成研究进度被耽搁,重则造成研究完全失败!代测能够充分保证测定成功,从而防止了样品损失。当然,样品质量是测定成功的前提,而且样品质量只有用户自己才能控制和保证。生化检测试剂盒的基本原理 生化检测试剂盒,又称生化试剂盒,是利用特定的生物成分、动力学及化学反应等技术制备的试剂盒,用于检测生理学、病理学、药理学等领域中特定的生物分子或化学物质。生化检测试剂盒包括底物、酶试剂盒、探针等多个组成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化检测试剂盒检测的基本原理。在该过程中,底物与酶在细胞膜上结合形成基质酶,进而形成底物-酶复合物。随着时间的推移,底物-酶复合物逐渐分解,释放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代谢,同时底物、酶和代谢产物都会对复合物的稳定性产生影响,从而影响检测试剂盒的检测结果。生化试剂盒可以检测的样本类型有哪些? 生化试剂盒的实验原理是基于化学反应,理论上是不受生物种属及样本类型的限制。生化试剂盒样本检测通常只分样本类型,不分种属。但是某些指标在不同种属或类型样本中的提取方式不同。因此,具体情况请参见说明书或与技术支持联系确认。生化试剂盒样本检测的一般要求:1)于生化检测而言,样本＊-好无溶血、脂血、黄-疸的现象。组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。2)样本处理后＊-好尽快进行检测,且保存于冰盒之上,待测。3)样本需澄清,若不澄清,需离心后取上清进行检测(特殊指标除外)。4)样本值应在试剂盒线性范围内,若超过线性范围,需稀释后再进行检测,若低于检测范围,需增加样本浓度后进行检测。微 量 分 析 法 微量分析(Microanalysis)在化学分析中，其试样重量为1-10mg的化学分析方法称为微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用点滴反应和显微结晶反应等灵敏度较高的分析方法，定量分析常用重量、容量及仪器等分析方法。在以试样重量不同的分析分类中还有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析 微量、超微量分析和常量分析主要的差别是取样的不同。一般称样在0.01克~0.001克者为微量分析，小于0.001克者为超微量分析。正因为样品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示剂的误差等对常量分析的影响可以忽略，而在微量和超微量分析时就会引起很大的误差。尤其是超微量分析要求更严格，须考虑到溶液本身在空气中的蒸发，因此在进行滴定时必缓在潮湿的空气中进行。 一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各种不同的形状。各种仪器分析法经过适当的改进后，可以直接应用在微量分析上。超微量分析由于样品太少，因此必须在显微镜下进行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些仪器分析(如电位滴定，电解和电导等)，也可用来作为超微量分析之用。 微量分析在研究工作中用得极广。尤其是在进行稀有元素化学研究时，在解决地球化学同题，研究某些稀有元素矿物粗成及其分配规律时，往往只能得到极少的样品，在这选种情况下一般的常量分析法是无法进行分析的，只有靠微量分析法来解决。另外，在生物化学中微量分析的应用更是普遍果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FBA)测试盒本品用于科研实验,不用于临床。测定意义:辅酶NAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的 NADH 经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成 ATP 的同时,形成大量的 ROS,同时 NADH 再生为 NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和 TCA 循环的强弱。较高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。测定原理:分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD+和 NADH,NADH 通过 PMS 的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在 570nm 下检测吸光值;而 NAD+可被乙醇脱氢酶还原为 NADH,进一步采用 MTT 还原法检测。需自备的仪器和用品:酶标仪、台式离心机、移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制:酸性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;碱性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:液体 10 mL×1 瓶,4℃保存;试剂二:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存;试剂三:粉剂×1 瓶,-20 ℃保存,用时加入 3mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;试剂四:粉剂×1 瓶,4 ℃保存,用时加入 3mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;试剂五:液体 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;试剂六:液体 30mL×1 瓶,4 ℃保存;试剂七:液体 50mL×1 瓶,4 ℃保存。NAD+和 NADH 的提取:1 血清(浆)中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照血清(浆)体积(mL):酸性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1mL 血清(浆),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。NADH 的提取:按照血清(浆)体积(mL):碱性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1mL血清(浆),加入 1mL 碱性提取液),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。2 组织中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照组织质量(g):酸性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1g 组织,加入 1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。NADH 的提取:按照组织质量(g):碱性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1g 组织,加入 1mL碱性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。3 细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104 个):酸性提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 酸性提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。NADH 的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104 个):碱性提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 碱性提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。充分混匀,静置 5min 后,20000g,25℃离心 5min,弃上清,沉淀中加入:混匀,取 200μL 转移至微量石英比色皿或 96 孔板中,570nm 下读取对照吸光值 A1 和测定管吸光值 A2,计算△A=A2-A1。注意事项:1、如果一次性测定样本数较多,可将试剂一、二、三和四按比例配成混合液。2、对照管和测定管的测定步骤的区别:对照管加完试剂一、二、三、四和五后必须马上加试剂六;测定管加完试剂一、二、三、四和五后必须反应 20min 后再加试剂六。3、反应过程中注意避光。4、若 NAD+测定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 测定中△A(A2-A1)≤0.0222,说明样本中辅酶含量较低,已低于检测限,可做如下调整:(1)将测定管避光静置时间 20min 延长到 60min;(2)在提取阶段增加取样量,即取 0.2g 样本或 0.2mL 样本加入 1mL 提取液。5、由于每一个测定管需要设一个对照管,本试剂盒 100 管保证测 48 个 NAD+或 NADH.NAD+和 NADH 含量的计算:(一) NAD+含量的计算标准条件下的回归曲线为 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 为△A,x 为 NAD+浓度 nmol/mL1、血清(浆)中 NAD+含量计算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、组织、细菌或细胞中 NAD+含量计算(1)按样本蛋白浓度计算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按样本鲜重计算NAD+(nmol/g 鲜重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按细菌或细胞密度计算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH 含量的计算标准条件下的回归曲线为 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 为△A,x 为 NADH 浓度 nmol/mL1、血清(浆)中 NADH 含量计算NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、组织、细菌或细胞中 NADH 含量计算(1)按样本蛋白浓度计算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按样本鲜重计算NADH (nmol/g 鲜重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按细菌或细胞密度计算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,2mL;V3:加入血清(浆)体积:0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。注 意: 检测限为 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鲜重 或 0.001nmol/mg prot
磷酸丙糖异构酶（TPI）测试盒本品用于科研实验,不用于临床。生化试剂盒可以检测的样本类型有哪些? 生化试剂盒的实验原理是基于化学反应,理论上是不受生物种属及样本类型的限制。生化试剂盒样本检测通常只分样本类型,不分种属。但是某些指标在不同种属或类型样本中的提取方式不同。因此,具体情况请参见说明书或与技术支持联系确认。生化试剂盒样本检测的一般要求:1)于生化检测而言,样本无溶血、脂血、的现象。组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。2)样本处理后尽快进行检测,且保存于冰盒之上,待测。求3)样本需澄清,若不澄清,需离心后取上清进行检测(特殊指标除外)。4)样本值应在试剂盒线性范围内,若超过线性范围,需稀释后再进行检测,若低于检测范围,需增加样本浓度后进行检测。微量法和分光光度法的区别?分光光度法:主流测定体系为1mL,测试仪器分光光度计,能够大限度地满足绝大多数用户的需要。微量法:主流测定体系为0.2mL,测试仪器或分光光度计,测定更加简便快捷。试剂盒规格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48样:50管指能够做50次测定,48样指可以测试48个样品。如果每个样品重复测定3次,那么只能测定16个样品。其中有2次测定用于空白管或者对照管。值得特别注意的是,50管/24样中由于每个样品测定都需要做对照,因此能够测定样品的数量仅为8个(假设做3次重复)(2)100管/96样:100管指能够做100次测定,96样指可以测定96个样品,如果每个样品重复测定3次,那么只能测定32个样品。其中有4次测定用于空白管或者对照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理论测定次数少1~3次。其它规格的含义依次类推。值得特别注意的是,100管/48样中由于每个样品测定都需要做对照,因此能够测定样品的数量仅为16个(假设做3次重复)。如何防止试剂盒失效? 不要过早订购,以免试剂盒失效.收到试剂盒后,检查外包装是否正常。马上打开,按照试剂盒说明书核对试剂数量是否正确,注意瓶中试剂状态是否与说明书一致。如果有问题,或者怀疑,马上联系公司销售,进行确认。如果没有问题,请务必按照说明书进行试剂的保存。注意,不同试剂,可能需要分别保存在常温(25°℃)、4℃和-20℃,务必分别按照要求保存,不要整个试剂盒放置于冰箱。如何进行预测定?(1)务必在7个工作日内进行预测定,以确定该试剂盒是否适合您的样品,以免造成试剂盒和样品的浪费。(2)选择2~3个预期差异比较大的样品,严格按照说明书进行操作,注意仪器工作状态,操作规范,控制好测定条件,尤其是温度。(3)如实与公司销售沟通预测定结果,公司技术人员会确认测定结果是否正常,是否需要调整,如何进行调整,从而确保您的测定结果可靠。荧 光 分 析 法 荧光分析法是指利用某些物质被紫外光照射后处于激发态，激发态分子经历一个碰撞及发射的去激发过程所发生的能反映出该物质特性的荧光，可以进行定性或定量分析的方法。由于有些物质本身不发射荧光（或荧光很弱），这就需要把不发射荧光的物质转化成能发射荧光的物质。例如用某些试剂（如荧光染料），使其与不发射荧光的物质生成络合物，各种络合物能发射荧光，再进行测定。因此荧光试剂的使用，对一些原来不发荧光的无机物质和有机物质进行荧光分析打开了大门，扩展了分析的范围。比色皿有哪些规格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法试剂盒都是选用1mL体系,只能用1mL比色皿,不可以用更大体积的比色皿,否则试剂量不够,无法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法试剂盒都是选用0.25mL比色皿。一般客户都选择使用标仪(需要自备酶标板)(3)紫外波长检测需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同规格的比色皿,其外观大小是一致的,都是1cm光径(也有0.5cm光径的比色皿,不常见,也可以用,但是计算时要注意修改计算公式),其内容积差异在于壁的厚度。代测的优点(1)更加省事儿,完全不必为测定犯难。用户只要提供样品和想测定的指标,就不再需要为测定操心了,不再受到操作技能、仪器设备和时间的限制,就等着拿到数据写论文。(2)测定数据更有保障。严格的测定质量管理体系,从而保证了测定结果的真实可靠。yy易游体育 还建立了免费预测定制度。(3)防止样品损失无论是用户自己完成测定全过程,还是购买试剂盒完成测定,都可能因为缺乏测定经验,导致测定失败,从而损失样品的情况。对于生命科学研究而言,样品是＊珍贵的。样品一旦损失,轻则造成研究进度被耽搁,重则造成研究完全失败!代测能够充分保证测定成功,从而防止了样品损失。当然,样品质量是测定成功的前提,而且样品质量只有用户自己才能控制和保证。生化检测试剂盒的基本原理 生化检测试剂盒,又称生化试剂盒,是利用特定的生物成分、动力学及化学反应等技术制备的试剂盒,用于检测生理学、病理学、药理学等领域中特定的生物分子或化学物质。生化检测试剂盒包括底物、酶试剂盒、探针等多个组成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化检测试剂盒检测的基本原理。在该过程中,底物与酶在细胞膜上结合形成基质酶,进而形成底物-酶复合物。随着时间的推移,底物-酶复合物逐渐分解,释放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代谢,同时底物、酶和代谢产物都会对复合物的稳定性产生影响,从而影响检测试剂盒的检测结果。生化试剂盒可以检测的样本类型有哪些? 生化试剂盒的实验原理是基于化学反应,理论上是不受生物种属及样本类型的限制。生化试剂盒样本检测通常只分样本类型,不分种属。但是某些指标在不同种属或类型样本中的提取方式不同。因此,具体情况请参见说明书或与技术支持联系确认。生化试剂盒样本检测的一般要求:1)于生化检测而言,样本＊-好无溶血、脂血、黄-疸的现象。组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。2)样本处理后＊-好尽快进行检测,且保存于冰盒之上,待测。3)样本需澄清,若不澄清,需离心后取上清进行检测(特殊指标除外)。4)样本值应在试剂盒线性范围内,若超过线性范围,需稀释后再进行检测,若低于检测范围,需增加样本浓度后进行检测。微 量 分 析 法 微量分析(Microanalysis)在化学分析中，其试样重量为1-10mg的化学分析方法称为微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用点滴反应和显微结晶反应等灵敏度较高的分析方法，定量分析常用重量、容量及仪器等分析方法。在以试样重量不同的分析分类中还有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析 微量、超微量分析和常量分析主要的差别是取样的不同。一般称样在0.01克~0.001克者为微量分析，小于0.001克者为超微量分析。正因为样品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示剂的误差等对常量分析的影响可以忽略，而在微量和超微量分析时就会引起很大的误差。尤其是超微量分析要求更严格，须考虑到溶液本身在空气中的蒸发，因此在进行滴定时必缓在潮湿的空气中进行。 一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各种不同的形状。各种仪器分析法经过适当的改进后，可以直接应用在微量分析上。超微量分析由于样品太少，因此必须在显微镜下进行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些仪器分析(如电位滴定，电解和电导等)，也可用来作为超微量分析之用。 微量分析在研究工作中用得极广。尤其是在进行稀有元素化学研究时，在解决地球化学同题，研究某些稀有元素矿物粗成及其分配规律时，往往只能得到极少的样品，在这选种情况下一般的常量分析法是无法进行分析的，只有靠微量分析法来解决。另外，在生物化学中微量分析的应用更是普遍磷酸丙糖异构酶（TPI）测试盒本品用于科研实验,不用于临床。测定意义:辅酶NAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的 NADH 经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成 ATP 的同时,形成大量的 ROS,同时 NADH 再生为 NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和 TCA 循环的强弱。较高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。测定原理:分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD+和 NADH,NADH 通过 PMS 的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在 570nm 下检测吸光值;而 NAD+可被乙醇脱氢酶还原为 NADH,进一步采用 MTT 还原法检测。需自备的仪器和用品:酶标仪、台式离心机、移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制:酸性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;碱性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:液体 10 mL×1 瓶,4℃保存;试剂二:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存;试剂三:粉剂×1 瓶,-20 ℃保存,用时加入 3mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;试剂四:粉剂×1 瓶,4 ℃保存,用时加入 3mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;试剂五:液体 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;试剂六:液体 30mL×1 瓶,4 ℃保存;试剂七:液体 50mL×1 瓶,4 ℃保存。NAD+和 NADH 的提取:1 血清(浆)中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照血清(浆)体积(mL):酸性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1mL 血清(浆),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。NADH 的提取:按照血清(浆)体积(mL):碱性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1mL血清(浆),加入 1mL 碱性提取液),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。2 组织中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照组织质量(g):酸性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1g 组织,加入 1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。NADH 的提取:按照组织质量(g):碱性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1g 组织,加入 1mL碱性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。3 细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104 个):酸性提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 酸性提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。NADH 的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104 个):碱性提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 碱性提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。充分混匀,静置 5min 后,20000g,25℃离心 5min,弃上清,沉淀中加入:混匀,取 200μL 转移至微量石英比色皿或 96 孔板中,570nm 下读取对照吸光值 A1 和测定管吸光值 A2,计算△A=A2-A1。注意事项:1、如果一次性测定样本数较多,可将试剂一、二、三和四按比例配成混合液。2、对照管和测定管的测定步骤的区别:对照管加完试剂一、二、三、四和五后必须马上加试剂六;测定管加完试剂一、二、三、四和五后必须反应 20min 后再加试剂六。3、反应过程中注意避光。4、若 NAD+测定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 测定中△A(A2-A1)≤0.0222,说明样本中辅酶含量较低,已低于检测限,可做如下调整:(1)将测定管避光静置时间 20min 延长到 60min;(2)在提取阶段增加取样量,即取 0.2g 样本或 0.2mL 样本加入 1mL 提取液。5、由于每一个测定管需要设一个对照管,本试剂盒 100 管保证测 48 个 NAD+或 NADH.NAD+和 NADH 含量的计算:(一) NAD+含量的计算标准条件下的回归曲线为 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 为△A,x 为 NAD+浓度 nmol/mL1、血清(浆)中 NAD+含量计算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、组织、细菌或细胞中 NAD+含量计算(1)按样本蛋白浓度计算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按样本鲜重计算NAD+(nmol/g 鲜重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按细菌或细胞密度计算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH 含量的计算标准条件下的回归曲线为 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 为△A,x 为 NADH 浓度 nmol/mL1、血清(浆)中 NADH 含量计算NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、组织、细菌或细胞中 NADH 含量计算(1)按样本蛋白浓度计算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按样本鲜重计算NADH (nmol/g 鲜重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按细菌或细胞密度计算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,2mL;V3:加入血清(浆)体积:0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。注 意: 检测限为 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鲜重 或 0.001nmol/mg prot
果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)/果糖-1,6-二磷酸酯酶测试盒本品用于科研实验,不用于临床。生化试剂盒可以检测的样本类型有哪些? 生化试剂盒的实验原理是基于化学反应,理论上是不受生物种属及样本类型的限制。生化试剂盒样本检测通常只分样本类型,不分种属。但是某些指标在不同种属或类型样本中的提取方式不同。因此,具体情况请参见说明书或与技术支持联系确认。生化试剂盒样本检测的一般要求:1)于生化检测而言,样本无溶血、脂血、的现象。组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。2)样本处理后尽快进行检测,且保存于冰盒之上,待测。求3)样本需澄清,若不澄清,需离心后取上清进行检测(特殊指标除外)。4)样本值应在试剂盒线性范围内,若超过线性范围,需稀释后再进行检测,若低于检测范围,需增加样本浓度后进行检测。微量法和分光光度法的区别?分光光度法:主流测定体系为1mL,测试仪器分光光度计,能够大限度地满足绝大多数用户的需要。微量法:主流测定体系为0.2mL,测试仪器或分光光度计,测定更加简便快捷。试剂盒规格中是100管和50管是什么意思?(1)50管/48样:50管指能够做50次测定,48样指可以测试48个样品。如果每个样品重复测定3次,那么只能测定16个样品。其中有2次测定用于空白管或者对照管。值得特别注意的是,50管/24样中由于每个样品测定都需要做对照,因此能够测定样品的数量仅为8个(假设做3次重复)(2)100管/96样:100管指能够做100次测定,96样指可以测定96个样品,如果每个样品重复测定3次,那么只能测定32个样品。其中有4次测定用于空白管或者对照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理论测定次数少1~3次。其它规格的含义依次类推。值得特别注意的是,100管/48样中由于每个样品测定都需要做对照,因此能够测定样品的数量仅为16个(假设做3次重复)。如何防止试剂盒失效? 不要过早订购,以免试剂盒失效.收到试剂盒后,检查外包装是否正常。马上打开,按照试剂盒说明书核对试剂数量是否正确,注意瓶中试剂状态是否与说明书一致。如果有问题,或者怀疑,马上联系公司销售,进行确认。如果没有问题,请务必按照说明书进行试剂的保存。注意,不同试剂,可能需要分别保存在常温(25°℃)、4℃和-20℃,务必分别按照要求保存,不要整个试剂盒放置于冰箱。如何进行预测定?(1)务必在7个工作日内进行预测定,以确定该试剂盒是否适合您的样品,以免造成试剂盒和样品的浪费。(2)选择2~3个预期差异比较大的样品,严格按照说明书进行操作,注意仪器工作状态,操作规范,控制好测定条件,尤其是温度。(3)如实与公司销售沟通预测定结果,公司技术人员会确认测定结果是否正常,是否需要调整,如何进行调整,从而确保您的测定结果可靠。荧 光 分 析 法 荧光分析法是指利用某些物质被紫外光照射后处于激发态，激发态分子经历一个碰撞及发射的去激发过程所发生的能反映出该物质特性的荧光，可以进行定性或定量分析的方法。由于有些物质本身不发射荧光（或荧光很弱），这就需要把不发射荧光的物质转化成能发射荧光的物质。例如用某些试剂（如荧光染料），使其与不发射荧光的物质生成络合物，各种络合物能发射荧光，再进行测定。因此荧光试剂的使用，对一些原来不发荧光的无机物质和有机物质进行荧光分析打开了大门，扩展了分析的范围。比色皿有哪些规格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法试剂盒都是选用1mL体系,只能用1mL比色皿,不可以用更大体积的比色皿,否则试剂量不够,无法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法试剂盒都是选用0.25mL比色皿。一般客户都选择使用标仪(需要自备酶标板)(3)紫外波长检测需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同规格的比色皿,其外观大小是一致的,都是1cm光径(也有0.5cm光径的比色皿,不常见,也可以用,但是计算时要注意修改计算公式),其内容积差异在于壁的厚度。代测的优点(1)更加省事儿,完全不必为测定犯难。用户只要提供样品和想测定的指标,就不再需要为测定操心了,不再受到操作技能、仪器设备和时间的限制,就等着拿到数据写论文。(2)测定数据更有保障。严格的测定质量管理体系,从而保证了测定结果的真实可靠。yy易游体育 还建立了免费预测定制度。(3)防止样品损失无论是用户自己完成测定全过程,还是购买试剂盒完成测定,都可能因为缺乏测定经验,导致测定失败,从而损失样品的情况。对于生命科学研究而言,样品是＊珍贵的。样品一旦损失,轻则造成研究进度被耽搁,重则造成研究完全失败!代测能够充分保证测定成功,从而防止了样品损失。当然,样品质量是测定成功的前提,而且样品质量只有用户自己才能控制和保证。生化检测试剂盒的基本原理 生化检测试剂盒,又称生化试剂盒,是利用特定的生物成分、动力学及化学反应等技术制备的试剂盒,用于检测生理学、病理学、药理学等领域中特定的生物分子或化学物质。生化检测试剂盒包括底物、酶试剂盒、探针等多个组成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化检测试剂盒检测的基本原理。在该过程中,底物与酶在细胞膜上结合形成基质酶,进而形成底物-酶复合物。随着时间的推移,底物-酶复合物逐渐分解,释放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代谢,同时底物、酶和代谢产物都会对复合物的稳定性产生影响,从而影响检测试剂盒的检测结果。生化试剂盒可以检测的样本类型有哪些? 生化试剂盒的实验原理是基于化学反应,理论上是不受生物种属及样本类型的限制。生化试剂盒样本检测通常只分样本类型,不分种属。但是某些指标在不同种属或类型样本中的提取方式不同。因此,具体情况请参见说明书或与技术支持联系确认。生化试剂盒样本检测的一般要求:1)于生化检测而言,样本＊-好无溶血、脂血、黄-疸的现象。组织样本需将血液洗净擦干后再进行称重处理。2)样本处理后＊-好尽快进行检测,且保存于冰盒之上,待测。3)样本需澄清,若不澄清,需离心后取上清进行检测(特殊指标除外)。4)样本值应在试剂盒线性范围内,若超过线性范围,需稀释后再进行检测,若低于检测范围,需增加样本浓度后进行检测。微 量 分 析 法 微量分析(Microanalysis)在化学分析中，其试样重量为1-10mg的化学分析方法称为微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用点滴反应和显微结晶反应等灵敏度较高的分析方法，定量分析常用重量、容量及仪器等分析方法。在以试样重量不同的分析分类中还有半微量分析和超微量分析等。微 量 和 超 微 量 分 析 微量、超微量分析和常量分析主要的差别是取样的不同。一般称样在0.01克~0.001克者为微量分析，小于0.001克者为超微量分析。正因为样品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示剂的误差等对常量分析的影响可以忽略，而在微量和超微量分析时就会引起很大的误差。尤其是超微量分析要求更严格，须考虑到溶液本身在空气中的蒸发，因此在进行滴定时必缓在潮湿的空气中进行。 一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各种不同的形状。各种仪器分析法经过适当的改进后，可以直接应用在微量分析上。超微量分析由于样品太少，因此必须在显微镜下进行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些仪器分析(如电位滴定，电解和电导等)，也可用来作为超微量分析之用。 微量分析在研究工作中用得极广。尤其是在进行稀有元素化学研究时，在解决地球化学同题，研究某些稀有元素矿物粗成及其分配规律时，往往只能得到极少的样品，在这选种情况下一般的常量分析法是无法进行分析的，只有靠微量分析法来解决。另外，在生物化学中微量分析的应用更是普遍果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)/果糖-1,6-二磷酸酯酶测试盒本品用于科研实验,不用于临床。测定意义:辅酶NAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的 NADH 经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成 ATP 的同时,形成大量的 ROS,同时 NADH 再生为 NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和 TCA 循环的强弱。较高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。测定原理:分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD+和 NADH,NADH 通过 PMS 的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在 570nm 下检测吸光值;而 NAD+可被乙醇脱氢酶还原为 NADH,进一步采用 MTT 还原法检测。需自备的仪器和用品:酶标仪、台式离心机、移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制:酸性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;碱性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;试剂一:液体 10 mL×1 瓶,4℃保存;试剂二:液体 3 mL×1 瓶,4℃保存;试剂三:粉剂×1 瓶,-20 ℃保存,用时加入 3mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;试剂四:粉剂×1 瓶,4 ℃保存,用时加入 3mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;试剂五:液体 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;试剂六:液体 30mL×1 瓶,4 ℃保存;试剂七:液体 50mL×1 瓶,4 ℃保存。NAD+和 NADH 的提取:1 血清(浆)中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照血清(浆)体积(mL):酸性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1mL 血清(浆),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。NADH 的提取:按照血清(浆)体积(mL):碱性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1mL血清(浆),加入 1mL 碱性提取液),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。2 组织中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照组织质量(g):酸性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1g 组织,加入 1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。NADH 的提取:按照组织质量(g):碱性提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取约 0.1g 组织,加入 1mL碱性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心 10min,取上清,置冰上待测。3 细胞或细菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104 个):酸性提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 酸性提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 碱性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。NADH 的提取:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照细菌或细胞数量(104 个):碱性提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 碱性提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),95℃水浴 5min(盖紧,以防止水分散失);冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混匀,10000g 4 ℃离心10min,取上清,置冰上待测。充分混匀,静置 5min 后,20000g,25℃离心 5min,弃上清,沉淀中加入:混匀,取 200μL 转移至微量石英比色皿或 96 孔板中,570nm 下读取对照吸光值 A1 和测定管吸光值 A2,计算△A=A2-A1。注意事项:1、如果一次性测定样本数较多,可将试剂一、二、三和四按比例配成混合液。2、对照管和测定管的测定步骤的区别:对照管加完试剂一、二、三、四和五后必须马上加试剂六;测定管加完试剂一、二、三、四和五后必须反应 20min 后再加试剂六。3、反应过程中注意避光。4、若 NAD+测定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 测定中△A(A2-A1)≤0.0222,说明样本中辅酶含量较低,已低于检测限,可做如下调整:(1)将测定管避光静置时间 20min 延长到 60min;(2)在提取阶段增加取样量,即取 0.2g 样本或 0.2mL 样本加入 1mL 提取液。5、由于每一个测定管需要设一个对照管,本试剂盒 100 管保证测 48 个 NAD+或 NADH.NAD+和 NADH 含量的计算:(一) NAD+含量的计算标准条件下的回归曲线为 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 为△A,x 为 NAD+浓度 nmol/mL1、血清(浆)中 NAD+含量计算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、组织、细菌或细胞中 NAD+含量计算(1)按样本蛋白浓度计算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按样本鲜重计算NAD+(nmol/g 鲜重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按细菌或细胞密度计算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH 含量的计算标准条件下的回归曲线为 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 为△A,x 为 NADH 浓度 nmol/mL1、血清(浆)中 NADH 含量计算NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、组织、细菌或细胞中 NADH 含量计算(1)按样本蛋白浓度计算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按样本鲜重计算NADH (nmol/g 鲜重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按细菌或细胞密度计算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,2mL;V3:加入血清(浆)体积:0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。注 意: 检测限为 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鲜重 或 0.001nmol/mg prot
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