牛（Bovine）低密度脂蛋白（LDL）ELISA检测试剂盒本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被低密度脂蛋白（LDL）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的低密度脂蛋白（LDL）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8 mmol/L试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于0.1 mmol/L。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。 FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. Bovine Low Density Lipoprotein (LDL) ELISA Kit instruction Intended useThis LDL ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of LDL in the sample, this LDL ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus LDL concentration. The concentration of LDL in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1. Standard microplate reader(450nm)2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.3. 37 ℃ incubatorPrecautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3. Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)Materials suppliedName96 determinations48 determinationsMicroelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent6.0ml3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A6.0ml3.0mlChromogen Solution B6.0ml3.0mlStop Solution6.0ml3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Note: Standard (S0 → S5) concentration was followed by:0,0.5,1,2,4,8 mmol/LReagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.3. Add Sample: Add testing sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis. 2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software. 3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.5. The sensitivity by this assay is 0.1 mmol/L6. Standard curve Storage： 2-8℃.validity： six months. FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
牛（Bovine）载脂蛋白A1（apo-A1）ELISA检测试剂盒本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被载脂蛋白A1（apo-A1）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的载脂蛋白A1（apo-A1）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8μg/mL试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于0.1μg/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
牛（Bovine）载脂蛋白B（apo-B）ELISA检测试剂盒本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被载脂蛋白B（apo-B）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的载脂蛋白B（apo-B）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、50、100、200、400、800μg/mL试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于1.0μg/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
牛（Bovine）α1酸性糖蛋白（α1-AGP）ELISA检测试剂盒本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被α1酸性糖蛋白（α1-AGP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的α1酸性糖蛋白（α1-AGP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、50、100、200、400、800 mg/L试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于1.0 mg/L。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
牛（Bovine）抗胰蛋白酶（AT）ELISA检测试剂盒本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被抗胰蛋白酶（AT）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗胰蛋白酶（AT）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8 ng/mL试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。 4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于0.1 ng/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
牛（Bovine）缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素（MIS/AMH）ELISA检测试剂盒本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素（MIS/AMH）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素（MIS/AMH）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、250、500、1000、2000、4000 pg/mL试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于10 pg/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。 FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. Bovine Mullerian Inhibiting Substance/Anti-Mullerian hormone (MIS/AMH) ELISA Kit instruction Intended useThis MIS/AMH ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of MIS/AMH in the sample, this MIS/AMH ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus MIS/AMH concentration. The concentration of MIS/AMH in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1. Standard microplate reader(450nm)2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.3. 37 ℃ incubatorPrecautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3. Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)Materials suppliedName96 determinations48 determinationsMicroelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent6.0ml3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A6.0ml3.0mlChromogen Solution B6.0ml3.0mlStop Solution6.0ml3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Note: Standard (S0 → S5) concentration was followed by:0,250,500,1000,2000,4000 pg/mlReagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.3. Add Sample: Add testing sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis. 2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software. 3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.5. The sensitivity by this assay is 10 pg/ml6. Standard curve Storage： 2-8℃.validity： six months. FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
牛（Bovine）肌肽（Carnosine）ELISA检测试剂盒本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被肌肽（Carnosine）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的肌肽（Carnosine）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、7.5、15、30、60、120 pmol/L试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于1.0 pmol/L。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
牛（Bovine）活性氧簇（ROS）ELISA检测试剂盒本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被活性氧簇（ROS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的活性氧簇（ROS）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、7.5、15、30、60、120 ng/ml试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于1.0 ng/ml。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。 FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. Bovine reactive oxygen species (ROS) ELISA Kit instruction Intended useThis ROS ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of ROS in the sample, this ROS ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus ROS concentration. The concentration of ROS in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1. Standard microplate reader(450nm)2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.3. 37 ℃ incubatorPrecautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3. Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)Materials suppliedName96 determinations48 determinationsMicroelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent6.0ml3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A6.0ml3.0mlChromogen Solution B6.0ml3.0mlStop Solution6.0ml3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Note: Standard (S0 → S5) concentration was followed by:0,7.5,15,30,60,120 ng/mlReagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.3. Add Sample: Add testing sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis. 2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software. 3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.5. The sensitivity by this assay is 1.0 ng/ml6. Standard curve Storage： 2-8℃.validity： six months. FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
牛（Bovine）β-羟基丁酸（β-HB）ELISA检测试剂盒本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被β-羟基丁酸（β-HB）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的β-羟基丁酸（β-HB）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、30、60、120、240、480μmol/L试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 试剂盒性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于1.0μmol/L。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。 FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. Bovine β－hydroxybutyrate (β-HB) ELISA Kit instruction Intended useThis β-HB ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of β-HB in the sample, this β-HB ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus β-HB concentration. The concentration of β-HB in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1. Standard microplate reader(450nm)2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.3. 37 ℃ incubatorPrecautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3. Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)Materials suppliedName96 determinations48 determinationsMicroelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent6.0ml3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A6.0ml3.0mlChromogen Solution B6.0ml3.0mlStop Solution6.0ml3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Note: Standard (S0 → S5) concentration was followed by:0,30,60,120,240,480 μmol/LReagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.3. Add Sample: Add testing sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis. 2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software. 3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.5. The sensitivity by this assay is 1.0 μmol/L6. Standard curve Storage： 2-8℃.validity： six months. FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
实验原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牛血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106) 捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106) 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。保存条件及有效期1.本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中牛血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106) 的含量；2.试剂盒保存：2-8℃；3.有效期：6个月。牛血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 (注：标本溶血会影响**检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。) 牛血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒 标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 牛血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒操作步骤 实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。 3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。牛血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒注意事项1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是**加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。 4.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。 5.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。 牛血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 计算 以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。3.一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请乘以稀释倍数。6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。7.底物请避光保存。 8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。 注意事项：收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4 ℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本， 将标本及时分装后放在-20 ℃或-70 ℃条件下保存。避免反复冻融。标本2 -8 ℃可保存48 小时，-20 ℃可保存1 个月。-70度可保存6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 牛血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒试剂盒性能1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。2.批内与批见应分别小于9%和15% 牛血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒
31011502012822