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　　孤腓肽ELISA试剂盒运用双抗体夹心法测定标本中（yy易游体育 名称）水平。用纯化的其抗体包被微孔板，制成固相抗体。往包被单抗的微孔中顺次参加本yy易游体育 ，再与HRP符号的其抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过完全洗刷后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），经过规范曲线核算样品中yy易游体育 的浓度。

　　试剂盒组成：

　　1、30倍浓缩洗刷液20ml×1瓶7停止液6ml×1瓶

　　2、酶标试剂6ml×1瓶8规范品（240ng/L）0.5ml×1瓶

　　3、酶标包被板12孔×8条9规范品稀释液1.5ml×1瓶

　　4、样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

　　5、显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

　　6、显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

　　标本要求：

　　1．标本收集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立刻进行实验，可将标本放于-20℃保存，但应避免重复冻融

　　2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3按捺辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

　　操作过程：

　　1.规范品的稀释：本试剂盒供给原倍规范品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

　　120ng/L5号规范品150μl的原倍规范品参加150μl规范品稀释液

　　60ng/L4号规范品150μl的5号规范品参加150μl规范品稀释液

　　30ng/L3号规范品150μl的4号规范品参加150μl规范品稀释液

　　15ng/L2号规范品150μl的3号规范品参加150μl规范品稀释液

　　7.5ng/L1号规范品150μl的2号规范品参加150μl规范品稀释液

　　2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、规范孔、待测样品孔。在酶标包被板上规范品精确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终究稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　操作程序总结：

　　1.预备试剂，样品和规范品

　　2.参加预备好的样品和规范品，37℃反响30分钟

　　3.洗板5次，参加酶标试剂，37℃反响30分钟

　　4.洗板5次，参加显色液A、B，37℃反响10分钟

　　5.参加停止液

　　6.15分钟之内度OD值

　　7.核算

　　注意事项：

　　1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2．浓洗刷液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗刷时不影响成果。

　　3．各步加样均应运用加样器，并常常校正其精确性，以避免实验误差。一次加样时刻**控制在5分钟内，如标本数量多，引荐运用排枪加样。

　　4．请每次测定的一起做规范曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于规范品孔榜首孔的OD值），请先用样品稀释液稀释必定倍数（n倍）后再测定，核算时请*终乘以总稀释倍数（×n×5）。